培养基的杀菌

玻璃器皿的洗涤和包装  
玻璃器皿的洗涤和包装 
1. 玻璃器皿的洗刷:玻璃器皿的使用前必须洗刷干净。锥形瓶、试管、 培养皿等浸入水中洗涤,用毛刷和洗衣粉洗刷,然后再用水冲净。移液管 先用洗液浸泡,再用水冲洗。洗刷干净的玻璃仪器在电热干燥箱中烘干后 备用。 2. 玻璃器皿灭菌前的准备工作: (1)培养皿又称双碟或平皿,由一底一盖组成一套。可以每套单独使用 纸包装,也可将几套一起用纸包装; (2)移液管应在距管口约1-2毫米处用铁丝塞入少许棉花(约1-1.5厘米 长);以防止细菌吸入口中,并避免将口中细菌吹入管内。棉花要塞的松 紧适宜。炊时以能通气但不使棉花滑下为准。塞好棉花的移液管**,放 在4-5厘米宽的长条纸的一端,约成45℃角,折叠纸条包住**,用左手 握住移液管身,右手将移液管压紧,在桌上向前搓转,以螺旋式包扎起来。 上端剩余纸条,折叠打结,准备灭菌。  
3. 棉塞的制作 
为了过滤空气,避免污染,试管或锥形瓶口需用棉花堵塞(脱脂棉易吸 水,勿用)。为了节省棉花或节省时间,在配置实验临时所用的无菌水 和培养基时,也可以用金属试管帽代替棉塞。装液体培养基的锥形瓶口, 可包扎6-8层纱布以代替棉花。 制作棉塞时,应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块,铺展于左手拇指 和食指扣成的圆孔上,用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞, 然后直接压入试管或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞入,也可以用折叠卷 塞法制作棉塞(见图2-2)。 制作的棉塞应紧贴管壁,不留缝隙, 以防外界微生物沿缝隙浸入。棉塞 不宜过紧或过松,塞好后以手提棉 塞,以瓶、管不下落为准。  
图2-2 棉塞的制作过程  
实验 培养基的制备与灭菌  
棉塞的2/3应在管内,上端露出1/3,便于提拔。如制作 时不慎沾上培养基,则不可再用。在棉塞和平口外要包 以厚纸,或将塞好后的试管集中放在铁丝筐内,上面盖 以厚纸,用线绳扎好,准备灭菌,避免灭菌后冷水淋湿 棉塞,并防止接种前培养基水分散失。 上面配制好的各种培养基,分装于锥形瓶内和试管中, 分别加以捆扎,做好标记。然后灭菌备用。  
一、实验目的 
1. 了解培养基的配制原理,掌握常用培养基 的制备方法; 2. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。  
二、基本原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累 代谢产物的营养基质。任何培养基中均需含有微生 物所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生 长因素,但不同营养类型、不同种类的微生物对营 养元素的要求又有很大差异。不同微生物对PH值要 求不一样,应将培养基调到一定的PH值范围。根据研究目的的不同,可将培养基制成固 体、半固体和液体三种形式。 固体培养基是在液体培养基中加入1.52.0%的琼脂作凝固剂,半固体培养基则加 入0.5-0.8%的琼脂。有时为了特殊的目的, 也可用明胶或硅胶等作为凝固剂。  
由于微生物营养类型不同,应提供不同种类的培 养基。在分离、培养异养微生物时,对一般细菌 常选用牛肉膏蛋白胨培养基,对放线菌常用高氏 合成I号培养基,培养酵母菌、霉菌则用麦芽汁或 豆芽汁葡萄糖培养基。  
三、实验器材  
1. 药品:牛肉膏;蛋白胨;氯化钠;琼脂; 2. 仪器及其他:试管;移液管;锥形瓶;烧杯; 量筒;玻璃棒;漏斗;纱布;棉花;报纸;天平或 台秤;等。  
四、实验内容 (一)常用培养基的配制 
1. 肉膏蛋白胨培养基(用于分离及培养细菌)成分: 牛肉膏 0.5g; 蛋白胨 1.0g; 氯化钠 0.5g; 琼脂 1.5-2.0g; 水 100mL; PH 7.0-7.2  
1、配制培养基的基本过程如下: (1)称量:按照培养基配方,正确称取各种原料放于烧杯中; (2)溶解:在上述烧杯中加入所需水量(根据实验需要可加 入蒸馏水或自来水)搅匀,加热溶解。应在药品全部溶解后 加水补足加热过程所蒸发的水分。配制固体培养基时,应将 已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热 **琼脂完全融化,并不断搅拌,以免糊底烧焦,**后加水补 足失去的水分; (3)调PH值:用1N NaOH或1N HCl调PH**7.2,尽量避免回 调; (4)分装、包扎灭菌  
注意: (1)牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后 倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放人热水中, 牛肉膏便与称量纸分离,立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮, 故称量时要迅速  
(2)配制固体培养基时,应将已配好的液体培养基煮沸, 
再将称好的琼脂加入,继续加热**琼脂完全融化,并不断 搅拌,以免糊底烧焦,**后加水补足失去的水分;或者将 琼脂单独溶解再加入到已配好的培养基中  
(3)调pH 检测培养基的pH,边加边搅拌,并随 时用pH试纸检测,直**达到所需pH范围。pH的 调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过 头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度  
2. 斜面培养基制作法 将已灭菌的装有琼脂培养基的试管,趁热置使成适当斜度, 凝固后即成斜面(图2-3)。制得的斜面以稍有凝结水析 出者为佳。如果制作半固体或固体深层培养基时,灭菌后 则应垂直放置**冷凝。 灭菌后的培养基,一般需进行无菌检查。**好从中取出12管(瓶),放在30-37℃恒温箱中保温1-3天,不长菌者 即证明灭菌已彻底,再放阴暗处保存。