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除少数培育基只需加热溶解，不需高压灭菌外，大部分培育基均需121℃高压灭菌15-30分钟。尤其是对无菌试验培育基灭菌不完全，直接关系到试验成果。因而有必要认真对高压灭菌器进行灭菌作用的验证。 1．试验资料
(1) 嗜热脂肪芽胞杆菌纸片。嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus) ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-l05 CFU/片。 (2) 121℃压力蒸气灭菌化学指示卡。
(3) 溴甲酚紫胨水培育基116℃高压灭菌20分钟后备用。 (4) 0-150℃留点温度计。 2．办法与成果
将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（以下简称菌片）用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各预备5-10份。别离放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中心5处。如灭菌器为二层，则需放10处。
留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计的水银柱甩**40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应存1℃之间，则阐明灭菌器内的温度散布是均匀的。
灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培育基内56-60℃培育24-48小时，调查色彩改变。如培育基变为黄色，阐明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，细菌仍可在培育基中成长，分化葡萄糖产酸变为黄色。如培育基色彩不改变仍为紫色，则阐明芽胞已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培育基内作为阳性对照，不加纸片的空白培育基作为阴性对照。
化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气灭菌时，由淡黄色变为黑色。跟着色彩改变的深浅，并与对照色比较，可判别灭菌作用是否到达要求。化学指示卡应在枯燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌作用的观测。
高压蒸气灭菌有必要使蒸气顺利进入灭菌器内，与灭菌物品触摸，并将原有的冷空气排出方可到达灭菌的作用。要进行空载热散布和满载热穿透力验证(满载时不超越总体积的2/3)。二种验证各重复三次，共做六次。5个点六次试验标明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色共同；培育基均未改变色彩，阐明高压蒸气灭菌作用合格。
高压灭菌器归于强检仪器，但强检仅仅对仪器物理参数的查核。所以做过强检的灭菌器还有必要进行灭菌作用的验证。一些单位常常疏忽了这个重要的问题。G内市售的手提灭菌器，往往仪器指针到达所需的温度，但灭菌物品的实践温度却未到达要求。导致灭菌物品不完全，影响试验成果。培育基灭菌不完全，影响培育基的运用及成果判别。因而高压蒸气灭菌器无菌作用的验证是一个有必要引起重视的问题。
